当裂解物样品经过 SDS-PAGE 电泳过程，准备转机到膜上以进行卵白质思绪检测。但淌若不这么作念呢? 试念念一下，淌若经过完竣的践诺门径后，您的条带不在您盼望的边界内，则可能需要顽抗体进行故障扼杀，但还应该对电泳和转机门径进行故障扼杀。其实，不错在转膜或电泳后通过用 Ponceau S（丽春红） 或考马斯亮蓝染色来不雅察总卵白迁徙的情况。 1) Ponceau S & 考马斯亮蓝 Ponceau S 染色液和考马斯亮蓝染色可竣事电泳后卵白质转机的可视化。它们关于阐述卵白质转机、见解靶点的存在以及省俭技术、践诺样本绝顶紧迫。此外，它们能深切出思绪中任何极度（举例气泡、转印不均匀）。 2) 选拔哪一种染料？   Ponceau S 和考马斯亮蓝染色齐是带负电的溶液，它们与带正电的氨基酸基团和非极性卵白区域联结。   膜和卵白水平   Ponceau S 检测到的卵白质水平为 200 ng 以上，与 PVDF、硝化纤维或尼龙膜兼容。传统的考马斯亮蓝仅与 PVDF 膜兼容，但不错检测 50 ng 及以上的卵白质。染色智慧度高可能很紧迫，但也要看具体的样品类型和进行的检测。 使用考马斯亮蓝溶液就弗成赓续进行卵白质思绪分析。这是因为溶液中存在的醇和酸会在使用后将卵白质样品固定在凝胶中。Ponceau S 染色液弗成固定卵白质，因此不错在染色后进行卵白质思绪分析。   践诺时长   可用的考马斯亮蓝染色溶液有几种类型，况兼践诺门径略有不同，技术上从两个小时到一整天不等。最常用的一种考马斯亮蓝 G-250 不错按以下风光使用：电转机后，用 ddH2O 洗涤聚丙.烯酰胺凝胶 3 次。在聚丙.烯酰胺凝胶上添加至少 25mL（或直到凝胶被清除）染色溶液。将带有染色溶液的凝胶放在摇床上，并冉冉搅动，以退缩凝胶粘附到容器上。染色技术取决于凝胶厚度和丙.烯酰胺的百分比。可能需要两个小时或更长技术智商在凝胶上看到均匀的蓝色。凝胶染色后，用 ddH2O 洗涤凝胶，并轻轻摇动一到两个小时，换几次 ddH2O 以去除过剩的游离染料。   Ponceau S 染色践诺门径概况需要 20 分钟，况兼无毒，况兼比考马斯亮蓝更辞谢。使用 Ponceau S (CST #59803) 不错按以下风光使用：总卵白经过电转机到膜上后，在 ddH2O中须臾冲洗膜，室温下在 Ponceau S 染色液中孵育膜 5~10 分钟，然后在 ddH2O 中冲洗膜 1~5 分钟，直至可见红色条带。然后不错用 1X TBS-T 冲洗五分钟，然后在冲洗膜之前对条带进行秀气或拍照。之后不错赓续进行践诺，况兼Ponceau S 的系数残留物会在阻滞门径中被洗去 。此外，Ponceau S 不会与抗体联结互相作用。   总体而言，两种践诺门径齐不错匡助确保您的效果。 淌若您需要检测 50-200 ng 边界内的卵白质，则考马斯亮蓝是您的最好选拔。然则，在 CST，咱们时常首.选Ponceau S，因为它速率快、易用、柔柔而灵验。   其他资源，供您学习： https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5445784/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/2429581/ https://advansta.com/seeing-blue-red-coomassie-vs-ponceau-staining/ https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5646381/   仅供征询使用。不得用于会诊经过。

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